| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | ~36000 | 溶剂 | Water |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
Annexin V-生物素缀合物是美国AAT Bioquest生产的膜联蛋白，膜联蛋白是在钙存在下与磷脂膜结合的蛋白质家族。膜联蛋白V是研究细胞凋亡的有用工具。它被用作探针以检测在细胞表面上表达磷脂酰丝氨酸的细胞，这是细胞凋亡中发现的特征以及其他形式的细胞死亡。有多种参数可用于监测细胞活力。膜联蛋白V-染料缀合物广泛用于通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的易位来检测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。Annexin V缀合物被广泛用于通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的Annexin V-生物素缀合物。
操作步骤
1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：
1.1 制备膜联蛋白V缀合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。
1.2 用测试化合物处理细胞一段时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。
1.3 离心细胞，得到1-5×10 5个细胞/管。
1.4 将细胞重悬于200μLAnnexin V缀合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。
1.5 在细胞中加入2μL膜联蛋白V缀合物。
可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于死细胞。
1.6 在室温下进行30至60分钟，避光。
1.7 在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μLAnnexin V缀合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。
1.8 使用流式细胞仪或荧光显微镜检测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。
2.使用流式细胞仪分析：
通过使用具有适当滤波器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。
注意：对贴壁细胞的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经过常规测试，因为在细胞分离过程中可能会发生特定膜损伤。
3.使用荧光显微镜分析：
3.1 吸取步骤1.6中的细胞悬液，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（步骤1.1）冲洗1-2次，然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液（步骤1.1）重悬细胞。 将细胞添加到载玻片上并盖上盖玻片。
注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上培养细胞。 与膜联蛋白V结合物孵育后（步骤1.6），用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，然后将膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片上。 将盖玻片倒在载玻片上并使细胞可视化。 与膜联蛋白V缀合物一起孵育后，也可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。
3.2 在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。
参考文献
Response of Mammalian cells to non-thermal intense narrowband pulsed electric fields
Authors: Sunao Katsuki, Yulan Li, Daiki Miyakawa, Ryo Yamada, Nobuaki Onishi, Soowon Lim
Journal: (2017): 1358--1361
