紫外-可见分光光度法是基于物质分子对紫外（200-400nm）和可见光（400-800nm）区域电磁辐射的选择性吸收而建立的分析方法。其核心原理是朗伯-比尔定律（Lambert-BeerLaw），即当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶液时，溶液的吸光度（A）与吸光物质的浓度（c）及光程长度（b）成正比，是物质在特定波长下的特征常数，反映吸光能力。
电子跃迁机制：紫外-可见光的能量与分子中价电子（如σ电子、π电子、n孤对电子）的跃迁所需能量匹配。当光子能量等于电子基态与激发态的能级差时，电子吸收光子发生跃迁，常见类型包括：π→π（不饱和键）、n→π（含杂原子基团）、电荷转移跃迁及配体场跃迁（配合物）。
仪器组成：分光光度计主要由光源（氘灯紫外区、钨灯可见区）、单色器（分光棱镜或光栅）、样品室、检测器（光电倍增管或光电二极管）及信号处理器构成。单色器将光源发出的复合光分解为单色光，通过样品后检测透射光强度，计算吸光度。
应用特点：
1.定性分析：通过吸收光谱（吸收峰位置、形状）鉴定官能团或共轭结构，如苯环在250nm出现B吸收带。
2.定量分析：依据比尔定律，通过标准曲线法或直接比较法测定浓度，灵敏度可达10⁻⁶~10⁻⁴mol/L。
3.局限性：需样品透明且稳定；重叠吸收峰需解谱；非吸收组分可能干扰。
该方法广泛用于有机化合物、生物分子（如蛋白质、核酸）及无机离子的检测，是化学、生物、环境等领域的基础分析手段。
紫外可见分光光度法原理
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