多孔细胞培养板

多孔细胞培养板（如6孔、12孔、24孔、96孔板等）是细胞生物学实验中常用的工具，广泛应用于细胞增殖、毒性测试、基因转染等研究。正确使用多孔细胞培养板对实验结果的准确性和可重复性至关重要。  
1.实验前的准备  
（1）选择合适的培养板  
多孔细胞培养板有不同的孔数和规格，需根据实验需求选择：  
-96孔板：适用于高通量筛选（如MTT、CCK-8检测）。  
-24孔或12孔板：适用于中等规模实验（如细胞迁移、转染）。  
-6孔板：适用于较大规模培养（如蛋白提取、RNA提取）。  
（2）培养板的预处理  
-无菌处理：新开封的培养板可直接使用，若重复使用需严格灭菌（如紫外线照射或酒精浸泡后烘干）。  
-包被处理：某些贴壁细胞（如原代细胞、神经细胞）需提前用多聚赖氨酸、胶原或明胶包被，以增强细胞贴附。  
（3）细胞准备  
-选择处于对数生长期的健康细胞。  
-用胰酶消化后，离心收集细胞，调整至适当密度（如1×10⁴~1×10⁵cells/mL，具体依细胞类型而定）。  
2.细胞接种  
（1）计算接种密度  
不同孔板的接种体积参考：  
-96孔板：每孔100-200μL（约5×10³~1×10⁴cells）。  
-24孔板：每孔0.5-1mL（约1×10⁵cells）。  
-6孔板：每孔2-3mL（约2×10⁵~5×10⁵cells）。  
（2）均匀接种  
-使用移液枪轻柔吹打细胞悬液，避免气泡。  
-沿孔壁缓慢加入液体，防止细胞聚集在中。  
-接种后轻摇培养板，使细胞分布均匀。  
（3）培养条件  
-将培养板放入37℃、5%CO₂培养箱中。  
-接种后静置2-4小时，待细胞贴壁后再移动培养板。  
3.细胞增殖检测  
（1）显微镜观察  
每日用倒置显微镜观察细胞形态、贴壁情况及污染。  
（2）细胞计数法  
-使用台盼蓝染色法计数活细胞。  
-或采用自动细胞计数仪进行定量分析。  
（3）CCK-8或MTT法  
-CCK-8法：向每孔加入10%CCK-8溶液，孵育1-4小时后测450nm吸光度。  
-MTT法：加入MTT溶液（终浓度0.5mg/mL），孵育4小时，溶解甲瓒后测570nm吸光度。  
（4）EdU/BrdU标记  
通过DNA合成标记检测增殖细胞，结合荧光显微镜或流式细胞术分析。  
多孔细胞培养板  
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